VII Съезд биофизиков России
Краснодар, Россия
17-23 апреля 2023 г. |
Программа СъездаСекции и тезисы:
Молекулярная биофизика. Структура и динамика биополимеров и биомакромолекулярных системОпределение биоэквивалентности дикому типу рекомбинантного S-белка SARS-CoV-2, путем оценки гуморального иммунного ответа морских свинок и специфичности связывания человеческого ACE2М.Н. Косенко1*, Г.С. Онхонова1, А.С. Гудымо1, Н.В. Данильченко1, О.С. Таранов1, С.Е. Олькин1, А.Р. Иматдинов1, Е.Ю. Прудникова1, Е.И. Даниленко1, А.В. Зайковская1, В.А. Евсеенко1, С.А. Пьянков1, А.Б. Рыжиков1 1.ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора; * kosenko_mn(at)vector.nsc.ru Спектр задач, в которых используются рекомбинантные белки, охватывает многие области от фундаментальных биологических исследований до таких прикладных направлений, как пищевая промышленность. Технологии, основывающиеся на рекомбинантных белках, показали свою эффективность при создании новых вакцин против инфекций, циркулирующих в человеческой популяции. При этом определение биоэквивалентности получаемых рекомбинантных белков «натуральным» является важной частью как структурных, так и функциональных исследований
В результате исследования была разработана методика экспрессии рекомбинантного S-белка SARS-CoV-2 в клетках HEK293 с последующей очисткой с помощью аффинной и ионообменной жидкостной хроматографии. Ведение поэтапного контроля с привлечением современных средств обработки полученных данных позволило добиться высокой чистоты получаемого продукта. Кинетическим методом биослойной интерферометрии показана функциональная активность целевого белка. Также для оценки биологической активности была проведена двукратная внутримышечная иммунизация морских свинок комплексом полученного рекомбинантного белка с ИСКОМ адъювантом «Матрикс-В». Методом ИФА и в реакции нейтрализации показан специфический вируснейтрализующий гуморальный ответ – кросс-реактивность в ИФА с антигеном Дельта -1:3200; в реакции нейтрализации средние значения геометрических титров антител сывороток в отношении SARS-CoV-2 варианта Дельта 1:63. Determination of bioequivalence to the wild type of recombinant SARS-CoV-2 S-protein by assessing the humoral immune response of guinea pigs and the binding specificity of human ACE2M.N. Kosenko1*, G.S. Onkhonova1, A.S. Gudymo1, N.V. Danilchenko1, O.S. Taranov1, S.E. Olkin1, A.R. Imatdinov1, E.Yu. Prudnikova1, E.I. Danilenko1, A.V. Zaikovskaya1, V.A. Evseenko1, S.A. Pyankov1, A.B. Ryzhikov1 1. State Research Centre of Virology and Biotechnology “Vector”, Rospotrebnadzor; * kosenko_mn(at)vector.nsc.ru The range of tasks in which recombinant proteins are used covers many areas from fundamental biological research to such applied areas as the food industry. Technologies based on recombinant proteins have shown their effectiveness in creating new vaccines against infections circulating in the human population. At the same time, the determination of the bioequivalence of the obtained recombinant proteins with "natural" ones is an important part of both structural and functional studies.
As a result of the study, a method for the expression of the recombinant SARS-CoV-2 S protein in HEK293 cells was developed, followed by purification using affinity and ion-exchange liquid chromatography. Conducting step-by-step control with the involvement of modern means of processing the obtained data made it possible to achieve high purity of the resulting product. The kinetic method of biolayer interferometry showed the functional activity of the target protein. Also, to assess the biological activity, a double intramuscular immunization of guinea pigs with a complex of the obtained recombinant protein with ISCOM adjuvant "Matrix-B" was carried out. The specificity of the immune response to the recombinant protein was confirmed by ELISA; cross-reactivity with the antigen of the Delta variant of the SARS-CoV-2 virus was 1:3200. In the neutralization reaction of the Delta variant of the SARS-CoV-2 virus, the geometric mean titer of antibodies in immune sera was 1:63. Докладчик: Косенко М.Н. 207 2023-02-16
|