Изучение молекулярных и клеточных механизмов апоптотических процессов является одной из наиболее актуальных проблем современной медицинской науки. Так, одним из путей инициации апоптоза является митохондриальный механизм, который характеризуется увеличением пероксидазной активности цитохрома С. Однако, данному событию предшествует взаимодействие цитохрома С с анионными фосфолипидами митохондриальных мембран. Данное взаимодействие приводит к конформационной перестройке активного центра цитохрома С.

Целью данной работы было исследование зависимости изменения структуры комплексов цитохрома С с фосфатидной кислотой при нагревании, а также определение значений температур, при которых данный конформационный переход происходит в присутствии фосфатидной кислоты.

Исследование было проведено при помощи спектрофлуориметрии при значениях длины волны возбуждения и испускания 280 и 335 нм соответственно. Исследование было выполнено в диапазоне температур 25-90°C с шагом 5°C. Образцы содержали комплексы цитохрома С с фосфатидной кислотой или фосфатидилхолином.

Ранее при помощи хемилюминесценции было показано, что изменение пероксидазной активности цитохрома С происходит наиболее выражено при добавлении фосфатидной кислоты. В присутствии фосфатидной кислоты изменялась форма кинетической кривой, показывая резкое увеличение интенсивности. А при исследовании зависимости флуоресценции от температуры для аналогичных комплексов цитохрома С с фосфолипидами показано, что температура конформационного перехода для комплексов [цитохром С+ фосфатидилхолин] и [цитохром С+ фосфатидная кислота] составляла 66°С и 75°С соответственно.

Полученные результаты подтверждают ранее исследованные функциональные изменения цитохрома С и способность фосфатидной кислоты оказывать на них влияние. Можно предположить, что эти отличия связаны с тем фактом, что конформационные переходы для комплексов [цитохром С + фосфатидилхолин] и [цитохром С + фосфатидная кислота] происходят при разных температурах.

The study of molecular and cellular mechanisms of apoptotic processes is one of the most urgent problems of modern medical science. Thus, one of the ways to initiate apoptosis is the mitochondrial mechanism, which is characterized by an increase in the peroxidase activity of cytochrome C. However, this event is preceded by the interaction of cytochrome C with anionic phospholipids of mitochondrial membranes. This interaction leads to a conformational rearrangement of the active center of cytochrome C.

The purpose of this work was to study the dependence of changes in the structure of cytochrome C complexes with phosphatidic acid when heated, as well as to determine the temperatures at which this conformational transition occurs in the presence of phosphatidic acid.

The study was carried out using spectrofluorimetry at excitation and emission wavelengths of 280 and 335 nm, respectively. The study was performed in the temperature range of 25-90°C with a step of 5°C. The samples contained cytochrome C complexes with phosphatidic acid or phosphatidylcholine.

Previously, using chemiluminescence, it was shown that the change in the peroxidase activity of cytochrome C occurs most pronounced with the addition of phosphatidic acid. In the presence of phosphatidic acid, the shape of the kinetic curve changed, showing a sharp increase in intensity. And when studying the temperature dependence of fluorescence for similar cytochrome C complexes with phospholipids, it was shown that the temperature of the conformational transition for the complexes [cytochrome C+ phosphatidylcholine] and [cytochrome C+ phosphatidic acid] was 66°C and 75°C, respectively.

The results obtained confirm the previously studied functional changes of cytochrome C and the ability of phosphatidic acid to influence them. It can be assumed that these differences are related to the fact that conformational transitions for [cytochrome C + phosphatidylcholine] and [cytochrome C + phosphatidic acid] complexes occur at different temperatures.