В предыдущих работах было показано наличие иммуногенного потенциала умирающих и мертвых клеток глиомы GL261, подвергшихся фотодинамическому воздействию (ФДТ) на основе pz IV. Эти клетки активно испускают ассоциированные с повреждением молекулярные паттерны, такие, как АТФ и HMGB1, а также экспонируют белок кальретикулин на клеточную мембрану, что является сигналом для активации антигенпрезентирующих клеток.

В настоящей работе иллюстрируется, что клетки, умирающие в результате ФДТ активно фагоцитируются дендритными клетками.

Было проведено моделирование иммунного ответа на опухолевые антигены. Клетки глиомы GL261 предварительно метили CellTracker Green CMFDA и подвергали их фотоиндуцируеруемой клеточной гибели на основе pz IV. После чего их собирали и в течение 2 часов сокультивировали с незрелыми дендритными клетками, предварительно изолированными из костного мозга мыши С75/Bl7. Далее клетки окрашивали антителами PE-Cy-anti-CD11c и анализировали методом проточной цитометрии. В качестве контроля использовались дендритные клетки, сокультивированные с живыми неиндуцированными опухолевыми клетками и клетками, убитыми неиммуногенным путем.

Было показано, что клетки, подвергшиеся фотоиндукции на основе pz IV, активно фагоцитируются антигенпрезентирующими клетками, в отличии от живых клеток и клеток, убитых несколькими циклами заморозки-оттаивания. Таким образом, клетки глиомы подвергшиеся фотоиндуцированной клеточной гибели на основе pz IV могут вызывать более активный иммунный ответ. Однако для формирования полноценного вывода необходимо также рассмотреть фенотипическую активацию дендритных клеток, а также проанализировать процесс высвобождения основных сигнальных молекул IL-12 p70 и IL-6 активированными дендритными клетками.

Исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда № 22-25-00716, https://rscf.ru/project/22-25-00716/

Previous studies have shown the presence of immunogenic potential in dying and dead glioma GL261 cells exposed to photodynamic effects (PDT) based on pz IV. These cells actively emit DAMP’s, such as ATP and HMGB1, and also exposure calreticulin on the cell membrane, which is a signal for antigen-presenting cells.

In this study, we showed that cells dying as a result of PDT attract dendritic cells (DC) and are actively phagocytized by them.

To demonstration the immune response to tumor antigens, bone marrow dendritic cells were co-cultured with GL261 glioma cells. GL261 cells, pre-stained with CellTracker Green CMFDA were subjected to photoinduced cell death based on pz IV. After that, they were collected and co-cultured with bone marrow-derived dendritic cells for 2 hours. Next, the cells were collected from the culture plates, stained with PE-Cy-anti-CD11c antibodies and analyzed by flow cytometry. Dendritic cells co-cultured with live non-induced tumor cells were used as a control.

It has been shown that cells undergoing photoinduction based on pz IV are actively phagocytized by antigen-presenting cells, unlike living cells and cells killed by several freeze-thaw cycles. Thus, glioma cells that have undergone photoinduced cell death based on pz IV can cause a more active immune response. However, in order to form a final conclusion, it is also necessary to consider the activation of dendritic cells, to analyze the process of release of the main signaling molecules by activated DC.